溫茹淑1,鄭清梅1,劉興隆2,郭江山2,方展強3,李業松1,楊業明1 (1.嘉應學院生物系,廣東梅州514015;2.梅州市水產研究所,廣東梅州514011;3.華南師范大學生命科學學院,廣東廣州510631) 作者簡介 溫茹淑(1974-),女,廣東梅縣人,碩士,講師,從事動物學教學及研究。
摘要:以“正大康”草魚顆粒飼料配方為基礎日糧,將1%的复合微生物制劑作為飼料添加劑投喂草魚,30ｄ后分別測定草魚的生長性能指標与肝胰臟、腸道的淀粉酶和脂肪酶的活性。結果顯示,實驗組草魚的体重和体長分別比對照增長8.93%(Ｐ<0.01)和3.93%(Ｐ<0.01);肝胰臟和腸道的淀粉酶的活性分別提高227.36%(Ｐ<0.01)和239.56%(Ｐ<0.01),脂肪酶的活力分別提高22.51%(Ｐ<0.01)和7.16%(Ｐ<0.01)。從而表明,复合微生物制劑能有效促進草魚的生長与提高消化能力,為其在水產養殖中的應用提供參考依据。
關鍵詞 复合微生物制劑;草魚;淀粉酶;脂肪
近年來,复合微生物制劑在人類、畜牧業、農業等方面的應用研究取得較快發展,在水產養殖中的應用研究也取得了一定的成效[1]。目前,在水產養殖方面有不少關于复合微生物制劑改善水質、提高水產動物生長的報道[2-5],但對水產養殖動物体內的本身的作用机制研究相對較少。為此,筆者開展了复合微生物制劑對草魚肝胰臟以及腸道的淀粉酶、脂肪酶的影響,以期為該制劑的應用提供理論依据。
1 材料与方法
1.1 試驗魚 試驗在廣東省梅州市水產研究所養殖基地進行。養殖池每口約2000ｍ2,水深1.5ｍ,試驗用魚為該養殖場健康的草魚苗,每尾平均体重為(141.9±10)ｇ。
1.2 分組及飼養管理 复合微生物制劑主要由光合細菌(Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ)、芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓ)、酵母(Ｙｅａｓｔ)与乳酸杆菌(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)等組成。光合細菌的有效細菌菌落為1.5×108ＣＦＵ/ｇ,芽孢杆菌的有效細菌菌落為1×108ＣＦＵ/ｇ,酵
母的有效細菌菌落為1×109ＣＦＵ/ｇ,乳酸杆菌的有效細菌菌落為3×108ＣＦＵ/ｇ,代替麥麩作為飼料添加劑投喂草魚。基礎飼料(“正大康”草魚顆粒飼料)組為對照,以添加質量分數1%复合微生物制劑為試驗組。每個試驗組和對照組各設3個平行。每組隨机投放2000尾草魚苗。按池內魚体重5%投喂基礎飼料。复合微生物制劑(粉劑)制法:先溶解于水中,再把溶液与基礎飼料混合,1ｈ后投喂草魚。每天上午9:00、下午4:00各投飼料1次,共30ｄ。
1.3 草魚生長性指標的測定 試驗結束前停食12ｈ,每組隨机取魚9尾,分別測量体重、体長,并根据下列公式計算生產性能指標,然后斷脊處死,置于冰箱-20℃冷凍備用。丰滿度,Ｋ=100×Ｗ/Ｌ3;絕對生長率,ｇ=(Ｗ2-Ｗ1)/(ｔ2-ｔ1);相對生長率,ｇ=(Ｗ2-Ｗ1)/Ｗ1×(ｔ2-ｔ1);瞬時生長率,ｇ=(ｌｎＷ2-ｌｎＷ1)/Ｗ1(ｔ2-ｔ1);生長比速,Ｃｖ=(ｌｇＬ2-ｌｇＬ1)×0.4343×(ｔ2-ｔ1)。上述公式中,Ｗ1為試驗開始時体質量(ｇ),Ｗ2為試驗結束時体質量(ｇ),Ｌ1為試驗開始時体長(ｃｍ),Ｌ2為試驗結束時体長(ｃｍ),ｔ1為試驗開始時間(ｄ),ｔ2為
試驗結束時間(ｄ)[6]。
1.4 淀粉酶活性的測定 淀粉酶活性的測定采用ＤＮＳ還原糖法[7]。在冰浴中分离草魚的肝胰臟和腸道,稱重,勻漿,得到勻漿液即為粗酶液。取勻漿粗酶液1ｍｌ,加當天配制的2%淀粉溶液4ｍｌ,于37℃水浴中糖化30ｍｉｎ,取出后立即于沸水中煮沸15ｍｉｎ,使淀粉 失活,得到糖化液。換試管,取糖化液1ｍｌ,加1ｍｌＤＮＳ顯色劑在沸水中煮沸顯色5ｍｉｎ,加蒸餾水稀釋10倍搖勻,于520ｎｍ下比色,同時以1ｍｌ已煮沸失活的粗酶液作空白對照。1個單位(Ｕ)淀粉酶活性為ｐＨ值7.0、37℃保溫30ｍｉｎ條件下,1ｇ組織中的淀粉酶能完全水解10ｍｇ淀粉時的酶量。
1.5 草魚脂肪酶活性的測定 測定時取出樣品,于室溫下自然解凍,用剪刀剪碎魚体后,將其在冰浴中用研缽迅速研磨成勻漿,加2倍体積(Ｗ/Ｖ)的預冷蒸餾水(0～4℃)制成粗酶液,置4℃的冰箱中保存待用,于12ｈ內測定勻漿液酶活性。脂肪酶的測定采用聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法[7]。取5ｍｌ0.025ｍｏｌ/ｍｌｐＨ值7.5的磷酸緩沖液和2ｍｌ聚乙烯醇橄欖油乳化液于50ｍｌ錐形瓶中,置30℃水浴中預熱5ｍｉｎ,然后加入勻漿粗 液0.5ｍｌ,准确反應30ｍｉｎ后,立即加入95%乙醇7.5ｍｌ,終止 反應。加1%酚酶指示劑3滴,用0.05ｍｏｌ/Ｌ氫氧化鈉標准液滴定脂肪酸含量。在上述條件下,將1ｇ組織中的脂肪 催化脂肪水解產生1μｍｏｌ脂肪酸的酶量定為一個 活性單位(Ｕ)。
1.6 數据分析 應用單因素方差分析處理試驗數据,并用ｔ檢驗法對數据平均數進行多重比較。
2 結果与分析
2.1 复合微生物制劑對草魚生長指標的影響 試驗前,草魚的平均体重為141.9ｇ,体長為23.1ｃｍ。經30ｄ的試驗,對照組的平均体重為154.68ｇ,試驗組的為168.42ｇ。与對照組相比,試驗組草魚体重增加8.93%(Ｐ<0.01)。對照組草魚的平均体長為24.81ｃｍ,試驗組魚為25.79ｃｍ。与對照組相比,實驗組草魚
体長增加3.93%(Ｐ<0.01)(表1)。可見,試驗組魚的各項生產性能指標高于對照組,試驗組魚的絕對生長率、相對生長率、瞬時生長率、生長比速分別為對照組的1.3、3.3、3.1、2.4倍,表明复合微生物制劑有效促進草魚的生長。
2.2 复合微生物制劑對草魚腸道、肝胰臟淀粉酶活性的影響
試驗發現,試驗30ｄ后,對照組和試驗組魚的腸道、肝胰臟淀粉 活性(Ｕ)都比投喂前有所提高,特別是試驗組魚的腸道、肝胰臟淀粉 活性有顯著提高(圖1)。試驗表明,与對照組相比,試驗組魚腸道淀粉 活性提高239.56%,肝胰臟淀
粉 活性提高227.36%(Ｐ<0.01)。不同組織間淀粉 活性存在差异,肝胰臟的淀粉 活性略高于腸道。
2.3 复合微生物制劑對草魚脂肪酶活性的影響
圖2表明,与投喂前相比,試驗后對照組和試驗組草魚脂肪酶活性都有所提高,其中對照組魚腸道和肝胰臟脂肪 活性分別提高4.53%和30.96%;試驗組魚腸道和肝胰臟脂肪 活性分別提高12.02%和60.43%。与對照組相比,試驗組魚腸道和肝胰臟脂肪 活性分別提高7.16%和22.51%(Ｐ<0.01)。
3 討論
3.1 复合微生物制劑對草魚生長的影響
复合微生物制劑含大量的益生菌,其菌体本身含有大量的營養物質,同時還含
有多种維生素、鈣、磷和多种微量元素、輔酶Ｑ等[8]。复合微生物制劑作為飼料添加劑被魚類攝食后,其所包含的多种微生物可進入消化系統,并在消化道內繁衍、代謝,產生動物生長所必需的營養物質,從而促進魚類的快速生長。該試驗投
放的复合微生物制劑含有光合細菌、芽孢杆菌、紅螺菌、酵母菌等有益微生物。試驗結果表明,与對照組相比,試驗組草魚的体重增加8.93%,体長增大3.93%,表明所使用的复合微生物制劑促草魚生長效果顯著,這与李卓佳等[9-11]的相關研究結果一致。
3.2 复合微生物制劑對草魚肝胰臟和腸道淀粉酶、脂肪酶活性的影響
微生物制劑可以促進動物免疫系統的發育,增強動物免疫功能,改善動物腸道內環境,增加動物腸道內的有益菌數目[12]。蒲紅宇等[13-15]的研究結果表明,微生物制劑對魚類蛋白 活性、淀粉 活性、脂肪 活性都有明顯提高,從而促進消化道分解 活性提高,促進了魚類對飼料的消化吸收和魚類生長。
試驗結果表明,投喂含光合細菌、芽孢杆菌、紅螺菌、酵母菌等的复合微生物制劑后,試驗組草魚肝胰臟和腸道淀粉酶、脂肪酶活性均比對照組顯著提高(Ｐ<0.01)。推測复合微生物制劑能為草魚提供外源脂肪 ,促進飼料中脂肪成分的
消化,從而提高了飼料的消化利用率。倪壽文認為,淀粉 主要是由散布于肝臟內的胰組織產生,并且在腸道中被進一步激活[19]。由此可推測肝胰臟是淀粉 生成的主要器官,它分泌机能的強弱直接影響魚類對食物中淀粉的消化能力,淀粉酶活性增強也是促進草魚生長的重要因素。
3.3 草魚淀粉酶、脂肪酶在不同組織中的活性比較
淀粉酶和脂肪酶在不同組織器官中其活性存在差异。青魚和鯽魚的肝臟中淀粉酶活性低于腸道,草魚、鯉魚和鰱魚的肝臟中淀粉酶活力高于腸道[18]。試驗結果表明,草魚肝胰臟淀粉酶的活力比腸道略高,這与倪壽文[19-21]等對銀鯽消化酶的研究結果一致。試驗發現,投喂前,草魚腸道脂肪 活性高于肝胰臟;試驗結束后,對照組和試驗組脂肪酶活力均有提高,其中肝胰臟脂肪酶的活力提高更顯著,且均高于腸道。Ｒｏｄｕｌｆ等研究表明,草魚淀粉酶和脂肪酶的活性除了受食物的影響外,還受水質、季節、環境溫度、攝食量、飼料中碳水化合物含量以及投喂次數等的影響[16-17]。因此,關于草魚肝胰臟和腸道中的淀粉 、脂肪 活性提高的机理及影響因素有待進一步探討。
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