翘嘴红鮊、花磆(鱼骨)对18种饲料原料蛋白质、氨基酸离体消化率
时间:2006-04-13 来源:河南畜牧网 作者:admin 点击：
作者:蒋 蓉 叶元土 丁晓峰 蔡春芳
摘 要 利用翘嘴红鮊、花 的肠道为消化酶酶源，采用离体消化率的测定方法，分别测定了对次粉、麸皮、玉米、小麦、大豆、豆粕、膨化大豆、葵粕、红花籽粕、花生粕、棉粕（1）、棉粕（2）、油菜籽、菜籽粕、菜籽饼、血粉、国产鱼粉、肉粉
作者:蒋 蓉 叶元土 丁晓峰 蔡春芳
摘 要 利用翘嘴红鮊、花 的肠道为消化酶酶源，采用离体消化率的测定方法，分别测定了对次粉、麸皮、玉米、小麦、大豆、豆粕、膨化大豆、葵粕、红花籽粕、花生粕、棉粕（1）、棉粕（2）、油菜籽、菜籽粕、菜籽饼、血粉、国产鱼粉、肉粉的离体消化率。翘嘴红鮊对大豆、花生粕、油菜籽、菜籽饼、豆粕有较好的消化率（消化率≥36.20%）；花磆对花生粕、油菜籽、豆粕、菜籽饼、棉粕（2）有较好的消化率（消化率≥33.87%），这些原料在人工配合饲料中可以优先选择。
翘嘴红鮊、花磆肉质细嫩，味道鲜美，营养价值高，深受广大百姓的喜爱。随着人们消费水平的不断提高，靠天然捕捞已不能满足市场的需求，因此养殖翘嘴红鮊、花磆就具有重要的意义。要进行大规模的人工养殖，就得研究人工配合饲料，配合饲料原料的选择除了要考虑原料的价格、营养水平及原料供应的稳定性外，另一个重要的因素就是原料的可消化性。饲料原料的消化率是评价原料可消化性的重要指标，由于活体消化率测定周期长、工作量大，因此可以采用离体消化率测定的方法测定特定养殖动物对特定饲料的消化率。本试验通过对18种蛋白质原料离体消化率的测定，以确定出适合这两种鱼的合适的、利用率高的蛋白质原料。
1 试验材料与方法
1.1 试验材料和方法
翘嘴红鮊、花磆均是太湖捕捞鲜活鱼。翘嘴红鮊体重为1 800～2 000g/尾，共6尾；花磆体重为210～250g/尾，共16尾。
1.2 饲料原料
选用次粉、麸皮、玉米、小麦、花生粕、棉粕（1）、油菜籽、豆粕、膨化大豆、棉粕（2）、血粉、鱼粉、大豆、菜籽粕、菜籽饼、肉粉、红花籽粕、葵粕共18种饲料原料，均为商品原料，经粉碎机粉碎后过80目筛，在70℃烘干。采用常规方法测定各原料的粗蛋白质、粗脂肪，结果见表1。
1.3 试验方法
按照常规解剖的方法取出鱼的肠道，参照叶元土等[1，2]的方法，按肠道重量10倍体积加入0.2M、pH7.4的磷酸缓冲液，用玻璃匀浆器匀浆后，冷冻离心机在-4～-2℃、6 000r/min离心20min，取上清液作为粗酶提取液，冰箱冷冻保存备用。
精确称取饲料原料样品0.300 0g于30ml带盖的试管中，加0.2M、pH7.4的磷酸缓冲液20ml，粗酶液5ml。为了防止微生物的干扰，参照王子淑[3]、叶元土[2]方法加入双抗（青霉素、链霉素合剂）300mg。在30℃水浴锅中保温进行酶解。每隔1h振摇一次，酶解12h后冷冻离心机-4～-2℃、6 000r/min离心20min，将沉淀于70℃烘干至恒重，用凯氏定氮法测定滤渣中的粗蛋白含量，用微量抽提法（甲醇-氯仿抽提法）测定滤渣中的粗脂肪含量。取上清200μl，加等体积的10%三氯乙酸、1.0 ml茚三酮试剂进行显色。以不加样品的为空白对照，用721型分光光度计在570nm测定吸光度（O.D570值）。用亮氨酸作标准曲线计算水溶液氨基酸的总量。
每个饲料原料样品设3个平行，每个试验重复2次。
1.4 离体消化率的计算
按照下述公式计算消化率。
样品总消化率=（饲料样品重量-滤渣样品重量）×100/饲料样品重量
蛋白质消化率=（饲料样品重量×样品粗蛋白含量-滤渣样品重量×滤渣粗蛋白含量）×100/（饲料样品重量×样品粗蛋白含量）
氨基酸生成率=生成的氨基酸总量×100/饲料样品重量（或饲料蛋白质重量）
1.5 数据处理
采用Excel对数据进行处理分析。
2 试验结果
2.1 总消化率、蛋白质和脂肪消化率
2种鱼对18种饲料原料的离体消化率结果见表2。
从表2可以看出，翘嘴红鮊对饲料原料的干物质消化率以大豆的消化率（47.23%）最高，血粉的消化率(3.84%)最低。其中大豆>花生粕>油菜籽>豆粕>菜籽饼>鱼粉>棉粕（1）>膨化大豆>棉粕（2）>肉粉>菜籽粕>麸皮>葵粕>红花粕>小麦>次粉>玉米>血粉。对饲料原料的蛋白质消化率以葵粕的蛋白质消化率（71.49%）最高，玉米的蛋白质消化率（6.59%）最低。其中，葵粕>红花粕>大豆>花生粕>油菜籽>棉粕（1）>肉粉>麸皮>菜籽饼>次粉>小麦>豆粕>膨化大豆>菜籽粕>鱼粉>血粉>棉粕（2）>玉米。
花磆对饲料原料的干物质消化率以花生粕的消化率(58.01%)最高，玉米的消化率（11.72%）最低，其中，花生粕>油菜籽>棉粕（1）>豆粕>膨化大豆>棉粕（2）>鱼粉、菜籽饼>大豆>肉粉>菜籽粕>次粉>红花粕>麸皮>血粉>小麦>玉米。对原料的蛋白质消化率以花生粕的蛋白质消化率（80.70%）最高，玉米的蛋白质消化率（12.92%）最低。其中，花生粕>次粉>葵粕>红花粕>豆粕>油菜籽>大豆>麸皮>小麦>棉粕（2）>棉粕（1）>肉粉>膨化大豆>菜籽饼>菜籽粕>鱼粉>血粉>玉米。
花磆对各种原料的蛋白质消化率普遍高于翘嘴红鮊。其中棉粕（2）、豆粕、小麦、次粉尤为突出。
2.2 对18种饲料蛋白质的酶解的氨基酸生成率
消化液中总的游离氨基酸量，并计算氨基酸的生成率，结果见表3。
除大豆外，花磆肠道酶解产生的氨基酸大于翘嘴红鮊的结果，游离氨基酸的生成率与蛋白质的消化率大小基本一致。
3 讨论
3.1 对18种饲料总消化率分析
Frukawa A等[5]认为，饲料及其蛋白质在鱼体消化道中的消化程度取决于受消化酶(蛋白质主要是蛋白酶)作用的时间，消化速度受消化酶的浓度、温度、底物和作用时间的影响，这是不同种类水产动物对于相同原料具有不同消化率的主要原因。比较分析翘嘴红鮊与花磆的总消化率（干物质消化率）可知，对于次粉、花生粕、棉粕（2）、油菜籽、豆粕、膨化大豆、棉粕（1）、血粉、鱼粉、菜籽粕、红花粕，是翘嘴红鮊的结果小于花磆的结果；而对于麸皮、玉米、大豆、小麦、菜籽饼，是翘嘴红鮊的结果大于花磆的结果；对于肉粉，翘嘴红鮊、花磆相同。从试验结果分析，翘嘴红鮊、花磆对不同的饲料原料的离体消化率差异显著（P<0.05）。
饲料原料总消化率和粗蛋白消化率之间存在明显不同，这可能是由于不同种鱼其粗酶液中各类酶的比例或活性不同所至[4]。
3.2 对18种饲料蛋白质消化率的总体评价
翘嘴红鮊属于中上层肉食性鱼类，而花磆属于中上层杂食性鱼类。分析两种鱼的蛋白质消化率可见，对于次粉、花生粕、麸皮、棉粕（2）、玉米、小麦、油菜籽、豆粕、膨化大豆、棉粕（1）、鱼粉、菜籽粕、肉粉而言，翘嘴红鮊的蛋白质消化率小于花磆的结果；而血粉、大豆、菜籽饼、红花粕、葵粕的蛋白质消化率大于花磆的结果。同时，红花粕、葵粕虽然总消化率很低，但是其蛋白质消化率却很高。这暗示大豆等饲料中其它营养物质（如糖类和脂肪）的消化率可能不及红花粕和葵粕等饲料。它进一步说明我们在饲料配方中选用多种饲料的必要性。从试验结果分析，翘嘴红鮊、花磆对不同饲料原料的蛋白质消化率差异显著（P<0.05）。
3.3 2种鱼对饲料原料消化能力的比较分析
本试验测定了翘嘴红鮊、花磆肠道对饲料总消化率、蛋白质和氨基酸的体外消化率，其结果能准确地判断两种鱼的肠道对不同饲料原料的消化能力的大小。这既能较正确地反映两种鱼肠道对饲料蛋白质降解的动态过程，也能定性地分析肠道对饲料原料的总体利用率（干物质和粗蛋白消化率）。在体外模拟鱼体内环境，快速、准确地利用鱼体消化道的粗酶液对饲料蛋白质进行酶解，以测定蛋白质在鱼体内消化程度和产生氨基酸的量。该方法能较便捷地估算鱼体对饲料的消化能力。
本试验的结果为翘嘴红鮊、花磆人工饲料的研制提供了很好的依据。从两种饲料的体外消化和酶解情况来看，大豆、花生粕、葵粕等消化率和酶解氨基酸生成量均与鱼粉较接近，甚至更好。因此，在开发翘嘴红鮊、花磆人工饲料时，可适当的多添加大豆、花生粕、葵粕等植物性蛋白原料，以减少动物性蛋白原料的用量。这样可有效地降低饲料成本；同时还能改善鱼体的品质，降低饲料物质对水域环境的污染。
参考文献
1 叶元土,林仕悔,罗莉．茚三酮法测定蛋白质饲料中水溶蛋白质成分[J] ．饲料工业,1993,14(9):18～20
2 林仕梅，叶元土，罗莉．草鱼对常规饲料消化率测定方法的研究[J].饲料工业，2001，(5)：23～26
3 王子淑.人体及动物细胞遗传学实验技术[M]．成都:四川大学出版社，1987.1～40
4 王友慧,叶元土,林仕梅,周兴华,向枭,李涛．3种鱼对鱼粉酶解动力学及离体消化的研究．西南农业大学学报,2003,24（3）:259～263
5 向枭，叶元土,周兴华,林仕梅,王友慧．铜鱼肠道、肝胰脏对四种蛋白质饲料的离体消化率测定．饲料工业，2003,24（1）:50～51
6 罗莉,林仕梅,叶元土,练家容,阮宝祥．长吻鮠、南方大口鲇对九种蛋白质饲料的离体消化率测定．饲料研究，1997，（1）：2～5
7 kawa A,Tsukabatra H.On the acid digestion method for the detemination of Chonic oxide as iondex substance in the study of digestibility in fish food[J].Bull.Jap.sci.fish,1966,(35):502～506
(注:字库中无鱼骨一字,全文用磆代替)
摘 要 利用翘嘴红鮊、花 的肠道为消化酶酶源，采用离体消化率的测定方法，分别测定了对次粉、麸皮、玉米、小麦、大豆、豆粕、膨化大豆、葵粕、红花籽粕、花生粕、棉粕（1）、棉粕（2）、油菜籽、菜籽粕、菜籽饼、血粉、国产鱼粉、肉粉的离体消化率。翘嘴红鮊对大豆、花生粕、油菜籽、菜籽饼、豆粕有较好的消化率（消化率≥36.20%）；花磆对花生粕、油菜籽、豆粕、菜籽饼、棉粕（2）有较好的消化率（消化率≥33.87%），这些原料在人工配合饲料中可以优先选择。
翘嘴红鮊、花磆肉质细嫩，味道鲜美，营养价值高，深受广大百姓的喜爱。随着人们消费水平的不断提高，靠天然捕捞已不能满足市场的需求，因此养殖翘嘴红鮊、花磆就具有重要的意义。要进行大规模的人工养殖，就得研究人工配合饲料，配合饲料原料的选择除了要考虑原料的价格、营养水平及原料供应的稳定性外，另一个重要的因素就是原料的可消化性。饲料原料的消化率是评价原料可消化性的重要指标，由于活体消化率测定周期长、工作量大，因此可以采用离体消化率测定的方法测定特定养殖动物对特定饲料的消化率。本试验通过对18种蛋白质原料离体消化率的测定，以确定出适合这两种鱼的合适的、利用率高的蛋白质原料。
1 试验材料与方法
1.1 试验材料和方法
翘嘴红鮊、花磆均是太湖捕捞鲜活鱼。翘嘴红鮊体重为1 800～2 000g/尾，共6尾；花磆体重为210～250g/尾，共16尾。
1.2 饲料原料
选用次粉、麸皮、玉米、小麦、花生粕、棉粕（1）、油菜籽、豆粕、膨化大豆、棉粕（2）、血粉、鱼粉、大豆、菜籽粕、菜籽饼、肉粉、红花籽粕、葵粕共18种饲料原料，均为商品原料，经粉碎机粉碎后过80目筛，在70℃烘干。采用常规方法测定各原料的粗蛋白质、粗脂肪，结果见表1。
1.3 试验方法
按照常规解剖的方法取出鱼的肠道，参照叶元土等[1，2]的方法，按肠道重量10倍体积加入0.2M、pH7.4的磷酸缓冲液，用玻璃匀浆器匀浆后，冷冻离心机在-4～-2℃、6 000r/min离心20min，取上清液作为粗酶提取液，冰箱冷冻保存备用。
精确称取饲料原料样品0.300 0g于30ml带盖的试管中，加0.2M、pH7.4的磷酸缓冲液20ml，粗酶液5ml。为了防止微生物的干扰，参照王子淑[3]、叶元土[2]方法加入双抗（青霉素、链霉素合剂）300mg。在30℃水浴锅中保温进行酶解。每隔1h振摇一次，酶解12h后冷冻离心机-4～-2℃、6 000r/min离心20min，将沉淀于70℃烘干至恒重，用凯氏定氮法测定滤渣中的粗蛋白含量，用微量抽提法（甲醇-氯仿抽提法）测定滤渣中的粗脂肪含量。取上清200μl，加等体积的10%三氯乙酸、1.0 ml茚三酮试剂进行显色。以不加样品的为空白对照，用721型分光光度计在570nm测定吸光度（O.D570值）。用亮氨酸作标准曲线计算水溶液氨基酸的总量。
每个饲料原料样品设3个平行，每个试验重复2次。
1.4 离体消化率的计算
按照下述公式计算消化率。
样品总消化率=（饲料样品重量-滤渣样品重量）×100/饲料样品重量
蛋白质消化率=（饲料样品重量×样品粗蛋白含量-滤渣样品重量×滤渣粗蛋白含量）×100/（饲料样品重量×样品粗蛋白含量）
氨基酸生成率=生成的氨基酸总量×100/饲料样品重量（或饲料蛋白质重量）
1.5 数据处理
采用Excel对数据进行处理分析。
2 试验结果
2.1 总消化率、蛋白质和脂肪消化率
2种鱼对18种饲料原料的离体消化率结果见表2。
从表2可以看出，翘嘴红鮊对饲料原料的干物质消化率以大豆的消化率（47.23%）最高，血粉的消化率(3.84%)最低。其中大豆>花生粕>油菜籽>豆粕>菜籽饼>鱼粉>棉粕（1）>膨化大豆>棉粕（2）>肉粉>菜籽粕>麸皮>葵粕>红花粕>小麦>次粉>玉米>血粉。对饲料原料的蛋白质消化率以葵粕的蛋白质消化率（71.49%）最高，玉米的蛋白质消化率（6.59%）最低。其中，葵粕>红花粕>大豆>花生粕>油菜籽>棉粕（1）>肉粉>麸皮>菜籽饼>次粉>小麦>豆粕>膨化大豆>菜籽粕>鱼粉>血粉>棉粕（2）>玉米。
花磆对饲料原料的干物质消化率以花生粕的消化率(58.01%)最高，玉米的消化率（11.72%）最低，其中，花生粕>油菜籽>棉粕（1）>豆粕>膨化大豆>棉粕（2）>鱼粉、菜籽饼>大豆>肉粉>菜籽粕>次粉>红花粕>麸皮>血粉>小麦>玉米。对原料的蛋白质消化率以花生粕的蛋白质消化率（80.70%）最高，玉米的蛋白质消化率（12.92%）最低。其中，花生粕>次粉>葵粕>红花粕>豆粕>油菜籽>大豆>麸皮>小麦>棉粕（2）>棉粕（1）>肉粉>膨化大豆>菜籽饼>菜籽粕>鱼粉>血粉>玉米。
花磆对各种原料的蛋白质消化率普遍高于翘嘴红鮊。其中棉粕（2）、豆粕、小麦、次粉尤为突出。
2.2 对18种饲料蛋白质的酶解的氨基酸生成率
消化液中总的游离氨基酸量，并计算氨基酸的生成率，结果见表3。
除大豆外，花磆肠道酶解产生的氨基酸大于翘嘴红鮊的结果，游离氨基酸的生成率与蛋白质的消化率大小基本一致。
3 讨论
3.1 对18种饲料总消化率分析
Frukawa A等[5]认为，饲料及其蛋白质在鱼体消化道中的消化程度取决于受消化酶(蛋白质主要是蛋白酶)作用的时间，消化速度受消化酶的浓度、温度、底物和作用时间的影响，这是不同种类水产动物对于相同原料具有不同消化率的主要原因。比较分析翘嘴红鮊与花磆的总消化率（干物质消化率）可知，对于次粉、花生粕、棉粕（2）、油菜籽、豆粕、膨化大豆、棉粕（1）、血粉、鱼粉、菜籽粕、红花粕，是翘嘴红鮊的结果小于花磆的结果；而对于麸皮、玉米、大豆、小麦、菜籽饼，是翘嘴红鮊的结果大于花磆的结果；对于肉粉，翘嘴红鮊、花磆相同。从试验结果分析，翘嘴红鮊、花磆对不同的饲料原料的离体消化率差异显著（P<0.05）。
饲料原料总消化率和粗蛋白消化率之间存在明显不同，这可能是由于不同种鱼其粗酶液中各类酶的比例或活性不同所至[4]。
3.2 对18种饲料蛋白质消化率的总体评价
翘嘴红鮊属于中上层肉食性鱼类，而花磆属于中上层杂食性鱼类。分析两种鱼的蛋白质消化率可见，对于次粉、花生粕、麸皮、棉粕（2）、玉米、小麦、油菜籽、豆粕、膨化大豆、棉粕（1）、鱼粉、菜籽粕、肉粉而言，翘嘴红鮊的蛋白质消化率小于花磆的结果；而血粉、大豆、菜籽饼、红花粕、葵粕的蛋白质消化率大于花磆的结果。同时，红花粕、葵粕虽然总消化率很低，但是其蛋白质消化率却很高。这暗示大豆等饲料中其它营养物质（如糖类和脂肪）的消化率可能不及红花粕和葵粕等饲料。它进一步说明我们在饲料配方中选用多种饲料的必要性。从试验结果分析，翘嘴红鮊、花磆对不同饲料原料的蛋白质消化率差异显著（P<0.05）。
3.3 2种鱼对饲料原料消化能力的比较分析
本试验测定了翘嘴红鮊、花磆肠道对饲料总消化率、蛋白质和氨基酸的体外消化率，其结果能准确地判断两种鱼的肠道对不同饲料原料的消化能力的大小。这既能较正确地反映两种鱼肠道对饲料蛋白质降解的动态过程，也能定性地分析肠道对饲料原料的总体利用率（干物质和粗蛋白消化率）。在体外模拟鱼体内环境，快速、准确地利用鱼体消化道的粗酶液对饲料蛋白质进行酶解，以测定蛋白质在鱼体内消化程度和产生氨基酸的量。该方法能较便捷地估算鱼体对饲料的消化能力。
本试验的结果为翘嘴红鮊、花磆人工饲料的研制提供了很好的依据。从两种饲料的体外消化和酶解情况来看，大豆、花生粕、葵粕等消化率和酶解氨基酸生成量均与鱼粉较接近，甚至更好。因此，在开发翘嘴红鮊、花磆人工饲料时，可适当的多添加大豆、花生粕、葵粕等植物性蛋白原料，以减少动物性蛋白原料的用量。这样可有效地降低饲料成本；同时还能改善鱼体的品质，降低饲料物质对水域环境的污染。
参考文献
1 叶元土,林仕悔,罗莉．茚三酮法测定蛋白质饲料中水溶蛋白质成分[J] ．饲料工业,1993,14(9):18～20
2 林仕梅，叶元土，罗莉．草鱼对常规饲料消化率测定方法的研究[J].饲料工业，2001，(5)：23～26
3 王子淑.人体及动物细胞遗传学实验技术[M]．成都:四川大学出版社，1987.1～40
4 王友慧,叶元土,林仕梅,周兴华,向枭,李涛．3种鱼对鱼粉酶解动力学及离体消化的研究．西南农业大学学报,2003,24（3）:259～263
5 向枭，叶元土,周兴华,林仕梅,王友慧．铜鱼肠道、肝胰脏对四种蛋白质饲料的离体消化率测定．饲料工业，2003,24（1）:50～51
6 罗莉,林仕梅,叶元土,练家容,阮宝祥．长吻鮠、南方大口鲇对九种蛋白质饲料的离体消化率测定．饲料研究，1997，（1）：2～5
7 kawa A,Tsukabatra H.On the acid digestion method for the detemination of Chonic oxide as iondex substance in the study of digestibility in fish food[J].Bull.Jap.sci.fish,1966,(35):502～506
(注:字库中无鱼骨一字,全文用磆代替)
