在饲料中直接添加菜籽对草鱼生长的影响

    鱼类主要利用蛋白质（氨基酸）和脂肪（油脂）作为能量物质，在配合饲料中适当增加脂肪的用量为鱼类提供足够的能量时，可以节约饲料蛋白质作为能量的消耗。饲料油脂是配合饲料的重要组成部分，在水产饲料中一般使用豆油、菜籽油、棉籽油等植物油脂。由于油脂的市场价格及其在配合饲料中成本不断地增长，如何寻求新的饲料油脂原料，以便在保障养殖效果的前提下，有效降低饲料配方成本就成为营养研究和饲料配制技术发展的重要问题之一。因此，本试验在草鱼配合饲料中直接添加菜籽以替代菜籽油对草鱼进行养殖试验，对养殖效果和部分生理指标进行检测，探讨在鱼饲料中直接使用菜籽的可行性及相应的技术保障。
1 试验材料和方法
1.1 试验鱼
    草鱼为一冬龄池塘鱼种，购回后以80万单位/50kg水的青霉素浸泡20min消毒。试验草鱼经过2周的养殖驯化后，按照随机分组方法将草鱼分为5个组，分组情况见表1。



1.2 试验饲料
    以4%的菜籽油作为对照，设计了以6.0%和11.5%的2个梯度的菜籽；为了消除菜籽可能产生的对鱼体的不利影响，设计了鱼虾Ⅳ号的对比试验，共5个试验组。
    基础饲料配方为进口鱼粉5%、豆粕27%、菜粕16%、棉粕16%、复合预混料1%、Ca(H2PO4)2 2%，共67%。再以麦麸和次粉平衡菜籽、菜籽油在配方中的比例，配方比例见表2。试验饲料设置了5个试验组，其编号分别与草鱼分组编号相对应，即1号组为添加4%菜籽油的试验组作为对照组、2号和3号分别添加11.5%和6.0%菜籽取代菜籽油并添加200mg/kg鱼虾Ⅳ号的试验组、4号和5号分别添加11.5%和6.0%菜籽取代菜籽油不添加鱼虾Ⅳ号的试验组。
    饲料原料经过粉碎后全部过4目筛，加工成直径1.0mm的硬颗粒饲料备用。

    采用常规饲料分析测定试验饲料的常规成分，结果见表3。各试验组间的蛋白质、脂肪、粗灰分、钙、磷无显著性的差异（P＞0.05）。菜籽含有28.37%的粗蛋白质、38.67%的粗脂肪，应该是一种很好的油脂原料和蛋白质原料。

1.3 养殖条件
    养殖试验在室内循环养殖系统中进行，单缸养殖容积0.4m3，16个养殖单体组成一个循环养殖系统；以自来水为水源，每天补充总水量的5%～10%；养殖水体经过沉淀、过滤除去残余饲料、粪便后流到蓄水池，经过增氧再由水泵抽回到各养殖缸内。试验期间水温26～28℃，溶解氧保持在6.0mg/l以上，pH值6.5～7.5。
    每天投喂饲料3次，投喂量为体重的3%～4%。正式养殖28d、52d时分别称重、统计饲料量，养殖期为52d。
1.4 检测指标及分析方法
1.4.1 生长速度
    以鲜重总重量变化和瞬间生长率表示生长速度，瞬间生长率=（lnW2-lnW1）/（T2-T1），W1、W2 分别为养殖开始和结束时的鱼体重，“T2-T1”为正式养殖时间（d）。
1.4.2 饲料利用效率
    以饲料系数、饲料蛋白质利用率、蛋白质沉积率和饲料蛋白质、氨基酸离体消化率表示草鱼对饲料的利用效率及饲料的可消化性。饲料蛋白质利用率=试验鱼增重量/（饲料投喂量×饲料蛋白质含量），饲料蛋白质沉积率=（试验结束鱼重量×鱼体蛋白质含量-试验开始鱼重量×鱼体蛋白质含量）/（饲料投喂量×饲料蛋白质含量）。采用离体消化率测定方法测定蛋白质和氨基酸的消化率，饲料蛋白质离体消化率=[（消化前饲料重量×饲料粗蛋白质含量-消化后滤渣重量×滤渣粗蛋白质含量）/消化前饲料重量×饲料粗蛋白质含量]×100；用茚三酮方法测定离体消化液中生成的氨基酸总量，氨基酸离体消化率=（生成的氨基酸量/消化饲料量）×100。
1.4.3 草鱼形体指标和常规营养成分分析
    试验结束时采用常规方法，测定草鱼的体重/体长、内脏重/体重、肝胰脏重/体重、肥满度，主要探讨饲料菜籽对草鱼形体状态和内脏重、肝胰脏重占体重的百分比的影响。
采用饲料常规分析方法，测定试验前后草鱼全鱼、肌肉、肝胰脏的水分、粗蛋白质、粗脂肪，探讨饲料菜籽对草鱼蛋白质、脂肪含量的影响。
1.4.4 肝胰脏功能试验
    采用King氏法测定了草鱼血清和肝胰脏的谷氨酸-丙氨酸转氨酶(GPT)活力，以判断饲料菜籽对草鱼肝胰脏功能的影响。
1.4.5 草鱼非特异免疫力的测定
    为了反映鱼体的免疫能力和抵抗能力，试验测定了血清和肝胰脏的超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶活力（LSZ）。
    溶菌酶活力的测定主要根据修改后的王雷‘2’和‘Cken’的方法进行。用0.067mol/l PBS(pH 6．4)将溶壁微球菌配成0．2mg/ml的菌悬液。每个样品取3ml菌悬液。吸取40μl血清加入到3ml菌悬液中，混匀后立刻在540nm下测定Ao值。然后在28℃水浴中温育30min，取出后置于4℃冰浴中以终止反应，再测定Ao值，按公式计算溶菌酶的活力：E=(Ao-A)/Ao。
2 试验结果
2.1 生长速度
    分别在正式养殖试验的第28d和第52d对各试验组草鱼进行称重，计算草鱼重量的变化，结果见图1。

    由图1可知，增重效果最为明显的为3号组（含6.0%菜籽和200mg/kg鱼虾Ⅳ号），在整个试验期内保持了持续的增长、其增重曲线近于直线。在饲料中添加11.5%菜籽的2号组（含200mg/kg鱼虾Ⅳ号）和4号组（不含鱼虾Ⅳ号）的增重速度差异不大，为5个组中最低的，且第28d以后的增重速度减慢，表现为曲线斜率减小。添加6.0%菜籽的5号组（不含鱼虾Ⅳ号）保持了与1号组相近似的增重速度。

    瞬间生长率可以排除因为试验鱼体个体大小对鱼体生长速度的影响，由表4可知， 3号组（含6.0%菜籽和200mg/kg鱼虾Ⅳ号）和5号组（含6.0%菜籽、不含鱼虾Ⅳ号）的瞬间生长速度在第28d时分别高于1号组7.8%和17.0%，在第52d时分别高于1号组18.7%和14.4%，而2号组（含11.5%菜籽和200mg/kg鱼虾Ⅳ号）和4号组（含11.5%菜籽、不含鱼虾Ⅳ号）在第28d时分别低于1号组18.7%和8.7%，在第52d时分别低于1号组20.4%和17.1%。
    上述结果表明，在草鱼饲料中添加11.5%的菜籽、不论是否添加鱼虾Ⅳ号均使增重速度和瞬间生长率下降；而以6.0%的菜籽替代4%的菜籽油组使草鱼的增重速度和瞬间生长率显著增加，尤以添加了200mg/kg鱼虾Ⅳ号的3号组效果更明显；鱼虾Ⅳ号的使用效果在28d以后逐渐显示出来。
2.2 饲料利用效率
2.2.1 饲料系数
    统计分析了28d和52d草鱼的增重、饲料系数，结果见表5。结果表明2号组（含11.5%菜籽和200mg/kg鱼虾Ⅳ号）和4号组（含11.5%菜籽不含鱼虾Ⅳ号）的饲料系数明显高于1号组，在28d时分别高于1号组31.5%和14.1%、在52d时分别高于1号组27.3%和30.4%；而3号组（含6.0%菜籽和200mg/kg鱼虾Ⅳ号）和5号组（含6.0%菜籽、不含鱼虾Ⅳ号）的饲料系数均显著低于1号组，在28d时分别低于1号组10.0%和27.5%、在52d时分别低于1号组21.1%和17.0%，其中添加鱼虾Ⅳ号的3号组饲料系数最低，为1.53。
    结果表明使用11.5%的菜籽使饲料系数显著增加、使用6.0%的菜籽使饲料系数显著下降，如果同时使用鱼虾Ⅳ号使饲料系数进一步降低。

2.2.2 对饲料蛋白质的利用率和饲料蛋白质沉积率
    经过分析、计算，得到52d时各组草鱼对饲料蛋白质的利用率和饲料蛋白质在鱼体的沉积率，结果见表6。添加11.5%菜籽的2号组、4号组草鱼对饲料蛋白质利用率较1号组分别下降20.53%、23.32%，蛋白质沉积率分别下降8.45%、11.58%，添加了鱼虾Ⅳ号的2号组好于4号组；添加6.0%菜籽的3号组、5号组的蛋白质利用率较1号组分别增加28.20%、21.43%，蛋白质沉积率分别增加78.13%、33.83%，也是添加了鱼虾Ⅳ号的3号组优于5号组。
    上述结果表明，在饲料中添加11.5%的菜籽使草鱼对饲料蛋白质利用率和蛋白质沉积率显著下降，而添加6.0%菜籽使草鱼对饲料蛋白质利用率和蛋白质沉积率显著增加，如果同时添加鱼虾Ⅳ号则可以使草鱼对饲料蛋白质利用率、蛋白质沉积率提高。

2.2.3 饲料蛋白质、氨基酸的离体消化率
    采用离体消化率分析方法、以草鱼肠道的粗酶提取液作为消化酶，在离体条件下测定了各试验组饲料的蛋白质离体消化率和氨基酸消化率，结果分别见表7和表8。由表7可以发现，在离体条件下，草鱼肠道对2号组、3号组的蛋白质消化率较高，均高于1号组，而4号组和5号组的蛋白质消化率低于1号组。

    在表8中，就生成的氨基酸占配合饲料的百分比和氨基酸离体消化率的结果看也有与蛋白质离体消化率类似的结果，即以试验组的2号组和3号组的结果最高。
    上述结果表明，在配合饲料中使用鱼虾Ⅳ号后提高了草鱼对饲料蛋白质和氨基酸的消化率；再将2号组与3号组、4号组与5号组的结果进行比较，均是前者高于后者，显示出与配方中菜籽的比例大小有一定的正相关关系，表明草鱼肠道对菜籽蛋白质、氨基酸具有很好的消化率。

2.3 草鱼常规成分及解剖结果
    每个试验组取5尾草鱼进行常规解剖，测定体重/体长比值、内脏比、肝胰脏比和肥满度，以便对试验草鱼的形体变化进行评价，结果见表9。由表9可知，除了3号组的体重/体长比高于1号组外（约高3%），其余各组均低于1号组，表明草鱼的体重增长慢于体长生长（3号组除外）。内脏比则是2～4号组均高于1号组，尤以2、4号组最高（分别高于1号组13.6%、22.7%），表明11.5%的菜籽使内脏增重加快；3、5号内脏比均为0.115（高于对照4.5%）。肝胰脏比是4、5号组高于1号组，2、3号组与1号组接近。肥满度仅2号组高于1号组，其它各组均低于1号组。上述结果表明，菜籽在配合饲料中的使用对草鱼形体有一定影响，使体重/体长比、肥满度降低，并使内脏比增加。使用鱼虾Ⅳ号的2、3号组的内脏比和肝胰脏比较对应的4、5号组低，有降低内脏比和肝胰脏比的作用。

    采用常规分析方法测定了各试验组草鱼全鱼、肌肉和肝胰脏的水分、粗蛋白质和粗脂肪含量，结果见表10。对于全鱼的水分含量在2～5号组均高于1号组；105℃烘干后的粗蛋白质、粗脂肪均高于1号组；添加11.5%菜籽的2、4号组与添加6%菜籽的3、5号组相比较，2、4号组的粗蛋白质低于3、5号组，而粗脂肪则是相反，表明菜籽用量增加后使鱼体脂肪含量增加、蛋白质含量下降。对于肌肉，鲜肉水分含量均高于1号组，105℃烘干后肌肉粗蛋白质除了生长最快的3号组低于1号组外，其余各组均高于1号组。对于肝胰脏，粗蛋白质含量均低于1号组、而粗脂肪均高于1号组，全鱼结果相似，添加11.5%菜籽的2、4号组与添加6%菜籽的3、5号组相比较，2、4号组的粗蛋白质低于3、5号组，而粗脂肪则是相反。

2.4 转氨酶活力测定结果
    转氨酶是催化氨基酸氧化分解时氨基转移到α酮酸的酶，谷氨酸-丙氨酸转氨酶（GPT）主要存在于肝胰脏，正常情况下主要存在于肝细胞内，在血清中的含量也很低。当组织病变尤其是肝胰脏发生病变而引起细胞的通透性增加时，细胞内的转氨酶被大量地释放出来并使血液中转氨酶活力显著增高。因此，在人体医学上以血清转氨酶活力大小作为肝功能是否正常的重要指标之一。本试验测定了5个组草鱼血清和肝胰脏的谷氨酸-丙氨酸（GPT）转氨酶活力，结果见表11，5个试验组中，添加了200mg/kg鱼虾Ⅳ号、6.0%菜籽的3号组GPT低于1号组，为1号组的19%；添加了11.5%的菜籽的2号组，即使添加了200mg/kg的鱼虾Ⅳ号，其草鱼血清GPT仍然显著增加，为1号组的2.03倍；而没有添加鱼虾Ⅳ号的4号组、5号组草鱼的血清GPT显著增高，分别为1号组的8.35倍、7.88倍，表明草鱼的肝胰脏受到严重的损伤。
    上述结果表明，在配合饲料中直接使用菜籽将使草鱼肝胰脏受到损伤，使血清转氨酶活力显著增高；同时使用鱼虾Ⅳ号可以对肝胰脏起到有效的保护作用，使血清转氨酶活力保持在低水平。

2.5 草鱼非特异免疫力分析
    溶菌酶（LSZ）是鱼体抵抗细菌感染的重要酶类，超氧化物酶（SOD）是鱼体清除体内氧自由基的主要酶类，2种酶活力大小可以反映出鱼体非特异免疫力的强弱。测定了5个试验组草鱼血清、肝胰脏的LSZ和SOD酶活力大小，结果见表12。在添加了菜籽的2～5号组与1号组结果相比较，血清、肝胰脏的LSZ酶活力下降。

3 讨论
3.1 菜籽在配合饲料中直接使用的可行性分析
    菜籽的粗蛋白质含量为28%、油脂含量达到38%，是一种很好的蛋白质原料和油脂原料。作为饲料原料的不利因素是菜籽含有对养殖动物健康、生长的有毒、有害物质，所以一直没有在配合饲料中直接使用。其有毒物质主要为芥子苷的分解产物如硫代葡萄糖苷和■唑烷酮，对动物组织的影响主要包括肝胰脏、肾脏、甲状腺和肠道等器官，可以造成这些器官组织的病理变化和功能性损害，如内脏器官肿大、出血，对肠道的损伤可能导致肠道粘膜的损伤、下痢等。鱼类没有明显的甲状腺，在实际生产中菜籽粕的用量达到10%～60%，养殖鱼类没有出现明显的不良反映，可能较陆生动物具有对菜籽粕有毒成分更强的耐受能力。
    从本试验结果来看，在草鱼饲料中直接使用11.5%的菜籽，在有和没有200mg/kg鱼虾Ⅳ号的情况下，使草鱼的生长速度分别下降20.4%、17.1%，使饲料系数增加27.3%、30.4%，使血清转氨酶活力增高2.03、8.35倍，使血清溶菌酶活力下降、血清超氧化物酶活力增高，这些结果显示出对草鱼生长、饲料利用和肝胰脏功能、非特异免疫力的不利影响。但是，添加6.0%菜籽，在有和没有200mg/kg鱼虾Ⅳ号的情况下，使草鱼生长速度增加18.7%、14.4%，使饲料系数下降21.1%、17.0%，显示出很好的生长效果和饲料利用效果。虽然也使血清转氨酶、超氧化物酶活力有所升高、使血清溶菌酶活力有所下降，但是，在使用鱼虾Ⅳ号后有效地减缓了菜籽带来的毒、副作用，对肝胰脏起到有效的保护作用、使生长速度、饲料利用效果等进一步提高。因此，本试验结果表明，在鱼饲料中直接添加菜籽有一定的可行性，在限制用量、并使用相应添加剂的情况下，可能会取得较添加菜籽油更好的养殖效果和饲料利用效果。
3.2 在配合饲料中直接使用菜籽的养殖效果分析
    通过本试验结果表明,在草鱼配合饲料中使用11.5%菜籽与使用4%的菜籽油的试验结果相比较,生长率和饲料利用效率均下降。11.5%菜籽组(2号组、4号组)的瞬间生长率均低于1号组,如在52d时的瞬间生长率在2、4号组分别低于1号组(1号组)20.4%和17.1%。饲料利用效率下降, 如在52d时的饲料系数在2、4号组分别高于1号组(1号组)27.3%和30.4%，蛋白质利用率分别下降20.53%、23.32%，饲料蛋白质沉积率分别下降8.45%、11.58%。表明高用量的菜籽对草鱼的生长和饲料利用产生严重的不利影响。
    对于6%菜籽试验组草鱼的生长效果和饲料利用效率均高于1号组，取得很好的效果，如在52d时的瞬间生长率在3、5号组分别高于1号组18.7%和14.4%。饲料利用效率也增强, 如在52d时的饲料系数在3、5号组分别低于1号组21.1%和17.0%，草鱼对饲料蛋白质利用率分别提高28.20%、21.43%，饲料蛋白质在鱼体的沉积率分别提高78.13%、33.83%。对于6%菜籽试验组,使用了鱼虾Ⅳ号的3号组与没有使用鱼虾Ⅳ号的5号组相比较,3号组的瞬间生长率(2.15)高于5号组(2.07)3.8%、而饲料系数3号组(1.53)低于5号组(1.61)5.2%，鱼虾Ⅳ号的使用显示出一定的生长和饲料利用效果。
在饲料中使用菜籽后， 对饲料蛋白质的消化率和氨基酸消化率有所提高， 在配合饲料中使用了鱼虾Ⅳ号后提高了草鱼对饲料蛋白质和氨基酸的消化率。
    在水产配合饲料中，油脂使用量提高后可能使水产动物体内的脂肪沉积量增加，影响鱼体的体型和鱼肉的质量；在肝胰脏脂肪含量增加后可能导致肝胰脏颜色淡化、肝硬化、纤维化等现象，并出现抗应激能力降低。通过对鱼体形体指标和常规成分的分析结果表明，在饲料中直接添加菜籽后使草鱼的形体指标和常规成分产生了影响，主要表现为使体重/体长比、肥满度降低，并使内脏比增加。使草鱼全鱼蛋白质、脂肪含量增加，肌肉脂肪含量增加，肝胰脏蛋白质含量下降、脂肪含量增加。
    通过对血清转氨酶、超氧化物酶、溶菌酶活力分析结果表明，在饲料中直接添加菜籽对草鱼肝胰脏造成一定的损伤，对草鱼的免疫功能产生不利影响，并使草鱼的非特异免疫力下降。如果同时使用鱼虾Ⅳ号则可有效减缓菜籽的上述不利影响。
如果使用植物油料原料替代植物油脂在配合饲料中使用，就必须考虑到可能带来的对水产动物的副作用和不利的影响。本试验中使用鱼虾Ⅳ号在提高饲料油脂利用效率、保护肝胰脏等方面表现出明显的效果。