张维忠 王建勇 仝太军 李怡 王凤娇 曹景萍 吕自力 王安江
(新疆金牛生物股份有限公司胚胎工程中心 乌鲁木齐 830026)
摘要:为探究荷斯坦供体牛超排潜能,对30头荷斯坦供体牛进行连续两次超排生产胚胎。获胚胎总数为508枚和482枚,可用胚平均分别为:9.73和10.06枚。经检验,胚胎发育的各阶段获胚胎数差异不显著(P>0.05)结果表明:间隔60D对供体牛连续超排可获得良好效果。
关键词:胚胎移植 超数排卵
在胚胎移植工作中,多次重复超排可充分发挥供体母畜的繁殖潜能,增加优秀母畜后代数①。如今,荷斯坦高产奶牛胚胎商品化日渐升温。高效、合理、持续的开发供体牛的产胚能力,可提高良种母牛的利用率。本试验对30头荷斯坦供体牛进行重复超排,并对其效果剖析。为探究开发荷斯坦供体牛胚胎资料的科学方案提高依据。
1 材料与方法
(1)供体母牛
超排所用供体牛为澳大利亚进口、健康、繁殖机能正常的荷斯坦奶牛30头,均为青年母畜。年龄为18-24月龄,舍饲、自由饮水、营养好。重复超排间隔时间为60D,所有供体牛连续两次超排,结束后两个月进行配种。
(2)药品
促卵泡素(FSH)中国科学院动物研究所生产 批号:100080
前列腺素(PG) 中国农业科学院畜牧研究所制 批号:2003219
CIDR 新西兰
(3)处理方法
供体牛在埋植CIDR后第9D开始超排,FSH分4D减量法注射。注射第3D早晚分别注射PG2支,之后开始观察发情,供体牛接受爬跨12H后第一次输精,隔约12H后第二次输精,输精剂量比正常人工受精多一倍,发情日计为0D。在第7D采取非手术法冲卵,在体视镜(10-80倍)下检卵和评定,按形态鉴定标准,可分为A、B、C、D ,4个等级,D级为不可用胚胎。记录黄体数、采卵数、可用胚胎数。冲卵后向子宫内注入土霉素药液以防止子宫感染②。肌注PG2支。
2 结果
(1)供体牛第一次超排所获胚胎的发育阶段及其所占比例统计结果见表1。
表1 配种7D所获得胚胎的发育阶段及其所占百分比
发育阶段 | 桑椹胚 | 致密桑椹胚 | 早期囊胚 | 囊胚 | 扩大囊胚 | 退化胚 | 未受精卵 | 获胚数 枚(%) |
枚(%) | 15(2.95) | 142(27.95) | 55(10.83) | 56(11.02) | 24(4.72) | 155(30.51) | 61(12.01) | 508 |
表1数据表明所获胚中,以致密桑椹胚、早期囊胚和囊胚为主,退化胚比例最大,未受精卵所占比例也较大。
(2)供体牛第二次超排所获胚胎的发育阶段及其所占比例统计结果见表2。
表2 配种7D所获得胚胎的发育阶段及其所占比例
发育阶段 | 桑椹胚 | 致密桑椹胚 | 早期囊胚 | 囊胚 | 扩大囊胚 | 退化胚 | 未受精卵 | 获胚数 枚(%) |
枚(%) | 1(0.207) | 164(35.02) | 62(12.86) | 45(9.34) | 30(6.22) | 144(29.88) | 36(7.47) | 482 |
表2数据显示所获可用胚胎多处于致密桑椹胚、早期囊胚、囊胚阶段,与第一次一致。退化胚胎和未受精卵比率较第一次超排结果有所下降,但其比例占获胚率还是较高。
(3)两次超排结果及其对比见表3。
表3 重复超排效果对比
超排 次数 | 桑椹胚 | 致密 桑椹胚 | 早期 囊胚 | 囊胚 | 扩大 囊胚 | 未受精卵 | 退化胚 | 均回收数 | 均冷冻数 |
第一次 | 0.5±7.74 | 4.73±4.23 | 1.83±2.07 | 1.87±2.29 | 0.8±2.06 | 2.03±2.06 | 5.17±3.29 | 16.93±6.98 | 9.73±4.99 |
第二次 | 0.03±0.18 | 5.47±3.21 | 5.467±3.21 | 1.50±2.19 | 1±2.03 | 1.2±2.02 | 4.80±3.32 | 16.07±7.01 | 10.07±5.24 |
第二次超排退化胚、未受精卵平均数较第一次略有下降。致密桑椹胚、早期囊胚、扩大囊胚平均数较第一次高。
3 分析与讨论
(1)研究表明供体母牛一年超排4次,每次间隔2-3个月,对超排效果无显著影响[1]。本试验结果表明,间隔期为60D的连续两次超排,两次超排结果差异不显著,第二次结果略好于第一次,这说明母牛的卵巢对激素反应的敏感性没有因为免疫抗原性等原因而下降。因此,间隔期为60D的连续两次超排方案在荷斯坦供体牛胚胎生产可试执行。
(2)表1、表2数据显示,两次超排未受精卵占各次获胚胎比率分别为12.01%、7.47%。可见在保证良好的配种技术的同时,采用品质较高的精液,进而提高胚胎可用率是非常必要的。
(3)表1表2数据可见,退化胚占各次获胚比率分别为30.15%、29.88%。引起胚胎退化因素很多,主要表现在饲养管理、子宫内环境、精液品质、FSH质量及打针技术等[2]。因此,在保证科学的饲养管理的同时使用质量好的FSH、精液,提高激素的注射水平是减少胚胎退化,提高可用率的措施之一。
(4)两次超排,供体牛对激素的实际吸收量相当,可见FSH的注射水平稳定。
(5)本试验仅从技术措施方面对两次超排结果加以初步分析,但没有对供体牛内分泌进行监测。因此,为完善荷斯坦供体母牛的超排方案,还需进一步研究。
参考文献:
[1] 陈静波、丁红、王安江等,《供体牛重复超数排卵及对繁殖性能的影响》,《草食家畜》,1992,25-27
[2] 卢全等,《安格斯比利时供体牛重复超排结果分析》,《草食家畜》,2003,74-76
[3] 蒋荣翔等,《岭高峰黄牛的超排效果分析》,《草食家畜》,2003,77-78