王宗元
牛在配种后经过一定时间要进行怀孕诊断，以便确定其是否已经怀孕。对妊娠牛，须改善饲养管理，及时采取保胎护胎措施，以保证胎儿正常生长发育，母体健康和避免流产。对未配上的母畜则要查明原因，采取防止漏配措施，从而减少空怀，缩短产犊间距，进而提高牛的繁殖率。尤其是随着奶牛饲养业的进一步发展，其怀孕产犊与否，直接关系到乳产量及牛场的经济效益。因此，在养牛业早期准确的妊娠诊断就显得非常重要和迫切。
牛早期妊娠诊断的方法很多，大体分为：（一）临床诊断法---问诊，视诊，望诊，听诊(因在牛怀孕6个月后才能进行，故对早期诊断意义不大)；（二）实验室诊断法---血清、乳、尿及子宫颈粘液的检查法；（三）特殊诊断法---超声波探测，免疫学诊断等。以下将以上方法进行详述。
一 临床诊断法
1.问诊
①问配种的次数，最后一次配种的日期，以便知道是否到了检查日期和该用何种方法检查；
②问最后一次配种后是否再发情。如果未返情，可能已怀孕，因为怀孕最早的症状是发情停止。不过，由于很多原因未怀孕又不发情的情况也是很多的，持久黄体即为一例。另外还应指出，牛在怀孕时也偶尔有发情现象；
③问配种后，经过一定时间，该牛食欲是否改善。通常是牛怀孕后食欲增加。
2.视诊
2.1子宫颈粘液检查法
妊娠牛子宫颈口粘液无特征性成分变化，子宫颈的松紧变化也不明显,但其粘液量却比未怀孕时显著增多。怀孕1.5-2个月时，颈口及其附近即有粘稠的粘液，但量尚少；3-4个月后就很明显,并变得粘稠，灰白或灰黄，如同稀粥。该方法的妊娠诊断准确率在80%左右。
2.2 阴蒂观察法
母牛经配种妊娠后,其阴蒂的形态、色泽及润泽度均发生变化,由此可判定该牛是否怀孕.配种初期的牛,其阴蒂体积较小,形似绿豆,呈红黄色,稍硬,发光,分泌物少,稍有充血。随妊娠日龄增加,阴蒂逐渐增大,有樱桃大小,呈紫黄色,湿润光滑,发硬,血管呈树枝状。这种变化对20-40天的妊娠母牛诊断准确率在90%左右。
3.直肠检查法
操作人员将手臂伸入母牛直肠触摸卵巢和子宫，根据其形态判定是否怀孕。其优点是牛怀孕20多天即可作出初诊，40天即能确诊，能够大致确定怀孕时间。
3.1子宫形态对比法
未孕牛：子宫卵巢均位于骨盆腔内，两子宫角大小相等，形状相似，弯曲如绵羊角状。经产牛有时右角略大于左角，迟缓，肥厚。能够清楚的摸到子宫角间沟。子宫经触摸立即收缩，变得有弹性，几乎有坚实感，能将子宫握在手中，前部并有角间沟将其分成两半，卵巢上无妊娠黄体。
妊娠牛：20-25天时孕角侧卵巢上有突出于卵巢表面的黄体，且空角侧卵巢大的多，子宫角粗细无变化，但子宫壁厚并有弹性。1个月时，子宫角间沟仍清楚，孕角及子宫体较粗，柔软壁薄，绵羊角状弯曲不明显。触诊时，孕角一般不收缩，有时收缩则感觉有弹性，内有液体波动，像软壳蛋样。空角常收缩，感觉有弹性且弯曲明显。子宫角的粗细以胎次而定，胎次多的较胎次少的稍粗。2个月时，角间沟不太清楚，但分岔明显，孕角比空角大一倍以上，壁软而薄，液体波动明显，孕角的一部分进入腹腔，孕侧卵巢向前移至耻骨前缘。3个月时，子宫角间沟消失，宫颈前移，直宫如袋状垂入腹腔，整个孕角比排球稍小，内有明显液体波动，偶尔可摸到悬浮的胎儿。用手提子宫颈，可以感到子宫重量加大，卵巢移至耻骨前缘下方，有时可以摸到。子宫壁软而不收缩，有时可摸到孕牛子宫中动脉。在体格较大的经产奶牛，由于怀孕前子宫已坠入腹腔，因此角间沟，子宫角及卵巢均不易摸到。
3.2卵巢上黄体形态对比法
以母牛发情配种15天排卵侧卵巢上的黄体形态为基准，在配种后第17天，19天，21天各检查一次，若对比卵巢上的黄体形态与15天时相同，则可判定该牛已孕；若比15天时卵巢上的黄体缩小或消失，则可判定该牛未孕。此法的妊娠诊断准确率一般达70%以上。
二 实验室诊断法
1.子宫颈粘液煮沸法
1.1蒸馏水煮沸法
妊娠牛子宫颈阴道粘液的粘性很大，凝固成块状，加水煮沸时，在很短的时间内粘液不溶解，而仍保持一定形状，如似云雾状，浮游在无色透明的液体中。打开被检牛的阴道，用长镊子或特制的长匙采取玉米粒大小的子宫颈粘液置于试管内，加蒸馏水5ml，在酒精灯上煮沸一分钟，若粘液不溶解且呈白色絮状物悬浮在无色透明的液体中，则可判定该牛已孕；若粘液溶解，溶液呈无色透明状，则判定该牛未孕；若粘液浑浊，呈微白色，并有小泡沫状和大小不等的凝絮浮游于表面，或粘附于管壁，则为子宫积脓或化脓性子宫内膜炎的表现。
1.2苛性钠溶液煮沸法
子宫颈阴道粘液中含有一种粘多糖-蛋白复合物，在碱性物质的作用下，加热煮沸，粘液分解，粘多糖即分解出糖，糖遇碱则呈淡褐色或褐色。同上法取玉米粒大小的子宫颈粘液置于试管内，加10%或25%的苛性钠溶液5毫升，煮沸一分钟。若液体呈橙色至暗褐色，则可判定该牛已孕；若溶液呈透明黄色，则可判定该牛未孕。用10%的苛性钠其妊娠诊断准确率可达85%以上，用25%的其妊娠诊断准确率可达90%以上。
2.子宫颈阴道粘液比重法
1-9个月怀孕母牛子宫颈阴道粘液的比重为1.013-1.016。未怀孕母牛的比重则不到1.008,因此可利用比重为1.008的硫酸铜溶液来测定子宫颈及阴道粘液的比重，以决定是否怀孕。如果粘液在溶液中是块状沉淀就认为是怀孕；反之，若粘液漂浮在溶液表面，则可判断为未孕。
3.尿液的碘酒测定法
取配种后23天以上母牛早晨的尿液10ml置于试管，用滴管在其中加入7%的碘酒1-2ml，仔细观察反应5-6分钟，若混液呈棕褐色或青紫色，则可判定该牛已怀孕；若混合液颜色无多大变化，则可判定为该牛未孕。该方法的妊娠诊断准确率可达93%左右。
4.乳汁的硫酸铜测定法
取配种后20-30天母牛中午的常乳和末把乳的混合乳样约1ml置与平皿中，加入3%硫酸铜溶液1-3滴，混和均匀，仔细观察反应，若混合液出现云雾状，则可判定该牛已孕；若混合液无变化，则判定该牛未孕。本方法妊娠诊断准确率达90%以上。
三 特殊诊断法
1.超声波探测法
1.1幅度调整型探测(A型超声诊断)
将超声波载入母牛体内，将胎囊中液体的反射波转变为电脉冲，进而再将电脉冲转变成以声响和灯光显示的报警信号，提示被检牛已孕。具体方法是将探测仪探头缓慢插入阴道，达到阴道穹隆，并使探头抵在穹隆下半部的阴道壁上，由左向右移动探头进行探查，必要时可将探头前后左右移动，发出连续的阳性信号且指示灯持续发光，即为已孕；否则未孕。妊娠母牛最早在配种后18-21天即可诊断出。
1.2超声多普勒测定法
利用超声波多普勒效应的原理，探测母畜怀孕后子宫血流的变化，胎儿心跳，脐带的血流和胎儿活动，并以声响信号显示出来的一种方法。具体方法是应用开膣器将阴道打开，送入探头，也可直接将探头慢慢插入阴道，使探头位置大致在阴道穹隆2cm以下的两侧区域。仔细辨听母体宫血音，妊娠35天左右出现“阿呼”音，40天以后有“蝉鸣”音。未孕牛或探头接触不良时，仅听到“呼呼”音，声音频率与母牛脉搏相同。胎儿死亡时，也只能听到“呼呼”音。胎儿脐血音为节奏很快的血流音，其频率为每分钟120-180次，从妊娠50天起比较明显。应用SCD-II型超声多普勒探测仪探诊30-70天的母牛，妊娠诊断准确率可达90%以上。
2.免疫学妊娠诊断法
2.1血液透明质酸酶免疫学诊断
根据抗体抗原结合的原理，利用孕牛血液中透明质酸酶的增多，可灵活应用于牛的早期妊娠诊断。具体方法是应用透明质酸酶作为抗原，制成透明质酸酶血清抗体，并使绵羊红细胞致敏；将被检牛的血清稀5万倍，取出0.5ml，加入透明质酸酶抗血清，混合均匀，再加入2滴绵羊致敏红细胞，混合均匀后在37度温箱中静置一小时后仔细观察，若不凝集则为已孕；反之则为未孕。本方法对妊娠20天以后的诊断准确率可达95%以上。
2.2 特异性怀孕抗原诊断法
母牛怀孕早期体内存在有特异性抗原，这种抗原在母牛怀孕后不久就可以从其胚胎、子宫及黄体中鉴定出来。用早期母牛胚胎免疫兔子，获得抗血清。取抗怀孕血清少许置于平皿中，然后滴入1-2滴被检母牛红细胞。若发生凝集现象则为已孕，反之则为未孕。该方法的妊娠诊断准确率可高达90%。
2.3血清、乳汁孕酮免疫测定法
国内外专家在这方面做了很多研究。其中有放射免疫法、酶联免疫吸附法、免疫乳胶凝集抑制试验法、单克隆抗体酶免疫法等。这些方法中有很多操作复杂，成本高，难以推广。但也有一些简单易行的可应用于实际生产。如免疫乳胶凝集抑制试验(LAIT)法易于掌握。具体方法是取被检牛非晨时自然排出的尿液和兰州生物制品研究所提供的免疫乳胶凝集抑制妊娠诊断试剂各一滴置于载玻片上，混合均匀，3分钟后用100倍显微镜观察。若不出现凝集颗粒，则该牛已孕；若出现均匀一致的凝集颗粒则可判定该牛未孕。该方法用于配种后23天左右的母牛，妊娠诊断准确率可高达92%。
综上所述，牛的早期妊娠方法确实不少，而且还有以上内容未提及的部分。如母牛可作为直肠诊断辅助检查的阴道检查和一些早孕因子(EPF)及一些早期妊娠特异物的免疫学诊断等。因此，各养殖场、繁育基地和奶牛场应根据自己的实际情况选择适合自己的行之有效的早期、准确、简便易行的方法来进行早期妊娠诊断。从而，缩短产犊尖距，极大地提高繁殖率，进而更好提高牛场产奶量和经济效益。
