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猪的人工授精实验室精液处理规范

日期:2006-5-9 11:25:00  来源:不详 主题:猪的人工授精实验室精液处理规范

 

目标:保证精液在不受不良物理、化学、生物因素影响的情况下,进行精液的处理和保存。

用品清单:采精用品、精液品质检查用品、精液稀释液配制与精液稀释分装用品、输精用品、消毒用品(详细用品见用品清单)

1.    采精室送来的精液应在最短的时间内进行稀释和保存,但在稀释前应对精液进行一些检查,以确定精液是否有使用价值。

2.    直观指标测定 

容量:新鲜精液容量应在100-250ml ;过多可能混有尿液或副性腺有炎症,过少说明采精方法不当或公猪生精能力降低。

色泽:精液色泽应为乳白色到灰白色,红色说明有血液,绿色说明有脓液,清黄色说明混有尿液,色泽不正常的精液必须废弃。

气味:精液应没有明显异味,有腥味说明有脓液,有臊味说明混有尿液,有异味的精液必须废弃;

3.    活力测定

将精液轻轻摇动或用洁净的玻璃棒搅动,用微量移液器或玻璃棒取精液10ul,放于预温后载玻片中央,盖上盖玻片,在载物台上预温片刻,用推进器将载玻片推至物镜下,在100和400倍下进行观察。如果精子无凝集、出现大群运动波,无明显死亡精子应为“很好”(5分);如果精液出现大群运动波,但有少量死亡精子应为“好”(4分);如果有成群运动,但有精子少量凝集现象,应为“一般”(3分);有大片凝集或死亡,但有部分精子在正常运动应为“差”(2分)。一般新鲜精液和保存精液应在3分以上方可用于稀释和输精。没有载物台恒温设备的实验室,可将预温至37℃的厚玻璃板和载玻片叠在一起,取10ul精液放于载玻片上,盖上盖玻片,迅速放在100倍镜头检查活力。

   在进行精子活力或密度测定时,应注意(1)显微镜的光源光圈应尽量小些,光线过强,就无法看清精子;(2)每次调节显微镜焦距时,都应先将载物台先调到与物镜最近的距离,但不能使盖玻片与物镜接触,从目镜观察,缓慢放低载物台,直到观察到精子为至;观察活力时应轻轻调节微调,以观察各个层次的精子活动情况。

4.    密度测定  

小规模精液站一般不进行密度测定,可通过精液的外观检查如色泽估测精子密度,呈乳白色说明精子密度大,白度越高说明浓度越高,相反则说明精子密度低。如果有条件可用计数板计数测定密度,如果有专用的比色仪进行密度测定更方便。也可将精液样品送至科研单位,让技术人员进行密度测定,并将此数值作为稀释倍数的参考。正常的全份精液的密度在1.5-3亿/毫升。浓份精液密度在3-6亿/毫升。

5.    畸形率测定 

初配公猪在使用前及正常使用的种公猪应每月进行一次畸形率测定,精子可用伊红、龙胆紫或纯兰、红墨水等染色剂染色,并在显微镜400倍下观察,畸形率不应高于25%。如果带中段原生质的精子增多,说明采精频率过高,如果断尾精子增多说明公猪受过高热或发烧过;其它畸形精多,可能公猪有先天性损征应予以淘汰。也可将精液样品送至科研单位进行评定。

6.    精液的稀释

经过品质检查合格的精液应立即进行稀释,稀释时应将精液与稀释液放在同一个水浴锅中2分钟等温后,将稀释液缓慢倒入精液中,并轻轻搅动或摇动。稀释时,最好精液仍放在原来的食品袋中。一般可根据需要和计算(估算)的稀释倍数、精液量,在精液中加入适量的稀释液。最少稀释倍数为1:2.5,最大稀释倍数不超过1:9。如果是收集的是全份精液(不包括最初射出的精液),可按1:3稀释,稀释后每个剂量应为80毫升,每个剂量含20毫升鲜精,这样可保证每个剂量中有30-60亿个精子。同样,如果是浓份精液(约为全份精液的一半),可按1:7稀释,每个剂量80毫升,每份含鲜精10毫升。

7.    精液的分装

将稀释后的精液放在台架上,分装管的玻璃管一端插入精液中,打开开关,用一支5ml一次性注射器套上移液管的吸咀与另一端连接,拉动注射器活塞,使精液充满分装管,关闭开关,取下注射器及吸咀,将分装管端插入精液袋的灌装口,并将精液袋挂在固定的板面上,使其自然悬垂。打开开关,使精液进入精液袋内,待精液灌装到规定刻度时,关闭开关,将管插入另一悬挂的精液袋内,然后打开开关。取下灌装好的精液袋,尽量减少袋内的空气量,放在热封口机上封口。封口后的精液可暂放在一个泡沫塑料盒中,等全部灌装完后,将精液袋在泡沫塑料盒中停留片刻,温度下降到25℃上下,再放入17℃恒温冰箱中保存。

8.    精液的保存

应确保冰箱功能正常和通电正常,每12或24小时将精液袋取出,上下翻转数次,使沉淀的精子与稀释液混合一下,有利于延长保存时间。如果停电时间不超过4小时,应在停电期间尽量减少开冰箱的次数。如果停电时间过长,冬季可在冰箱中放置30℃左右的水袋,夏季可在冰箱下层放置一些冰块,以维持合适的温度,这时应每隔2个小时检查以下冰箱内的温度。

9.    精液的运输

袋装精液可放在泡沫塑料箱中运输。输精时,也应将精液放在泡沫塑料箱中运至待配母猪舍内。

 
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